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新冠病毒抗原檢測(膠體金法)--神奇的“紅線”
發布日期:2022/12/19 13:33:13
病毒就像一顆包裹著橡皮糖夾心的什錦軟糖。
“橡皮糖夾心”位于病毒體的中心,主要成分為核酸(ssRNA),為病毒的復制、遺傳和變異提供遺傳信息。外層的“軟糖”是病毒體的蛋白質外殼,稱“核衣殼”(N),可保護病毒核酸免受外界因素的破壞,并能介導病毒進入宿主細胞。而入口之前,“軟糖”外包裹的一層“糖衣”便可以理解為病毒體的包膜,它是包繞在病毒核衣殼外面的雙層膜。

新型冠狀病毒的這層“糖衣”異常絢麗,其膜上有刺突糖蛋白(S)、包膜蛋白(E)和膜蛋白(M)。在這些結構蛋白中,N蛋白在不同SARS-CoV-2病毒株系中高度保守,且具有良好的免疫原性,為病毒侵染細胞后表達量最高的結構蛋白,是良好的檢測生物標志物。目前,新型冠狀病毒抗原檢測一般以檢測N蛋白為主。

假設這是一份存在新冠病毒特定抗原(N蛋白)的口咽/鼻咽拭子,經拭子處理液的釋放洗脫后,N蛋白隨著處理液被滴入樣品孔。
待測樣本在紙纖維所形成的毛細力拉動下,從試紙的一端流向另外一端。在此過程中,N蛋白將經歷三道關卡。
備注:第一關卡:金標抗體(金標記2019-nCoV抗體);第二關卡:T線抗體(2019-nCoV抗體);第三關卡:C線抗體(“金標記2019-nCoV抗體”二抗)。

樣本在毛細管作用下沿著檢測卡加樣孔端向前移動,如果樣本中含有新型冠狀病毒抗原,抗原將結合膠體金標記的新冠 N 蛋白抗體 MAb1,形成新冠病毒抗原-膠體金標記抗體復合物,復合物隨樣本繼續遷移到硝酸纖維素膜上,被固定在硝酸纖維素膜上的另一個新冠 N 蛋白抗體 MAb2 抗體捕獲,形成紫紅色的檢測線(T 線),顯示新型冠狀病毒抗原陽性;如果檢測線(T 線)不顯色,則表示新型冠狀病毒抗原陰性。檢測卡中還包含一條質控線 C 線,無論樣本中是否含有相應的待測物,紫紅色的質控線(C 線)都會出現,用于判讀層析過程是否正常。
質控: 用于判斷是否有足夠樣本,層析過程是否正常,金標新冠抗體隨液體層析到質控區(C)時被羊抗鼠新冠抗體捕捉形成金標新冠抗體-抗新冠抗體復合物,在質控區(C)形成紅色條帶。

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